粪大肠菌群数的测定

（1）样品稀释

在无菌操作下称取样品10g或吸取样品10ml，加入到带玻璃珠的90ml无菌水中，置于摇床上200r/min充分震荡30min，即成10-1稀释液。

（2）乳糖发酵试验

选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液1ml加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管，置44.5摄氏度恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24小时。如果所有乳糖胆盐发酵管都不产气不产酸，则为粪大肠菌群阴性，如果有产酸产气或只有产酸的发酵管，则按分离培养步骤进行。

（3）分离培养

从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置于36摄氏度条件下培养18-24小时。

（4）证实试验

从（3）中分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色，染色反应阳性为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽孢杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置44.5摄氏度条件下培养24小时。观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性，产气为粪大肠菌群阳性。

（5）结果

证实试验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克肥料样品中的粪大肠菌群数。