微生物有机肥料中有效活菌数的国家标准测定方法及步骤

（1）稀释

称取固体样品10g，加入带玻璃珠的100ml的无菌水中，静置20分钟，在旋转式摇床上200r/min充分震荡30分钟，即成母液菌悬液。

用5ml无菌转液管分别吸取5ml上述母液菌悬液加入45ml无菌水中，按1比10进行系列稀释，分别得到10-1,10-2,10-3、、、稀释倍数的菌悬液。

（2）加样及培养

每个样品取3个连续适宜稀释度，用0.5ml无菌移液管分别吸取不同稀释度菌悬液0.1ml，加至预先制备好的固体培养基平板上，分别用无菌玻璃刮刀将不同稀释度的菌悬液均匀地涂布于琼脂表面。

每一稀释度重复3次，同时以无菌水作空白对照，于适宜的条件下培养。

（3）菌落识别

根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应该重做。

（4）菌落计数

以出现20-30个菌落数的稀释度的平板为计数标准，（丝状真菌为10-150个菌落数），分别统计有效活菌数目和杂菌数目。当只有一个稀释度，其有效菌平均菌落数在20-300个之间时，则以该菌落数计算。若有两个稀释度，其有效菌落数在20-300个之间时，应该两者菌落总数之比值决定，若其比值小于等于2应该计算两者的平均数；若大于2，则以稀释度小的菌落数平均数计算。有效活菌数按下列公式计算，同事计算杂菌数。

N1=(x*k*v1/m0*v2)*108    N2=(x`*k*v1/v0*v2)*108

式中：

N1——————质量有效活菌数，单位为亿每克；

N2——————体积有效活菌数，单位为亿每毫升；

x·——————有效菌落平均数；

K———————稀释倍数；

V1———————基础液体积，单位为毫升；

V2———————菌悬液加入量，单位为毫升；

V0———————样品量，单位为毫升；

M0———————样品量，单位为克。